微生物過濾檢測是通過物理或化學(xué)方法富集樣品中的微生物，進(jìn)而分離和鑒定目標(biāo)菌種的過程。該方法廣泛應(yīng)用于水質(zhì)檢測、藥品無菌檢查、食品微生物污染分析等領(lǐng)域。常見的檢測對象包括細(xì)菌（如大腸桿菌、金黃色葡萄球菌）、真菌（如霉菌、酵母菌）等。準(zhǔn)確的分離與鑒定是確保檢測結(jié)果可靠的關(guān)鍵。
微生物過濾與分離方法
2.1樣品前處理與過濾
微生物過濾通常采用膜過濾法（MembraneFiltration,MF），適用于液體樣品（如水、飲料）。步驟如下：
1.樣品制備：均質(zhì)化液體或固體樣品（如食品需均質(zhì)稀釋）。
2.過濾：通過0.22–0.45μm孔徑的濾膜截留微生物。
3.轉(zhuǎn)移：將濾膜貼附于選擇性或非選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。
2.2選擇性分離技術(shù)
不同微生物需采用特定培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件：
-細(xì)菌：
-大腸桿菌：使用EMB（伊紅美藍(lán)瓊脂）或麥康凱瓊脂（MacConkeyAgar）。
-金黃色葡萄球菌：使用甘露醇高鹽瓊脂（MSA）。
-真菌：
-霉菌和酵母菌：使用沙氏葡萄糖瓊脂（SDA），添加抗生素抑制細(xì)菌生長。
微生物鑒定技術(shù)
3.1形態(tài)學(xué)鑒定
-菌落特征：觀察菌落形態(tài)（大小、顏色、邊緣、表面質(zhì)地）。
-如金黃色葡萄球菌呈金黃色、光滑凸起；霉菌菌落呈絨毛狀。
-顯微鏡觀察：革蘭染色（區(qū)分G?/G?細(xì)菌）、芽孢染色等。
3.2生化試驗
通過代謝特性鑒定菌種：
-氧化酶試驗：區(qū)分假單胞菌（陽性）與腸桿菌（陰性）。
-IMViC試驗：鑒定大腸桿菌（結(jié)果模式為＋＋--）。
-糖發(fā)酵試驗：如乳糖發(fā)酵能力區(qū)分大腸桿菌與沙門氏菌。
3.3分子生物學(xué)方法
-16SrRNA測序：細(xì)菌鑒定的“金標(biāo)準(zhǔn)”，可精確到屬或種水平。
-PCR技術(shù)：針對特定基因（如大腸桿菌的uidA基因）進(jìn)行擴增檢測。
-MALDI-TOFMS：通過蛋白質(zhì)指紋圖譜快速鑒定微生物。
應(yīng)用與挑戰(zhàn)
4.1實際應(yīng)用
-水質(zhì)監(jiān)測：檢測水中總大腸菌群和致病菌（如軍團(tuán)菌）。
-藥品無菌檢查：確保注射劑、生物制品無微生物污染。
-食品安全：檢測食品中的沙門氏菌、李斯特菌等。
4.2技術(shù)挑戰(zhàn)
1.低豐度微生物檢測：樣品中目標(biāo)菌含量低時需富集培養(yǎng)。
2.雜菌干擾：復(fù)雜樣品（如糞便、土壤）需優(yōu)化選擇性培養(yǎng)基。
3.快速鑒定需求：傳統(tǒng)方法耗時，需推廣分子生物學(xué)技術(shù)。
